机械/剪切应力

•使用由ARGEN软件控制的高架悬浮式磁力搅拌棒进行非接触搅拌（3d打印结构，具有廉价且易于获得的组件）

•通过往复式注射泵检查不同管径和成分的毛细管剪切

•由步进电机控制的顶置叶轮进行非接触式搅拌（电机和驱动器价格低廉且易于获得）

•通过蠕动泵从样品杯中再循环蛋白质样品

•通过蠕动泵通过不同过滤材料再循环蛋白质样品

•通过注射器通过二级检测器（MALS、荧光、UV等）从银中连续提取蛋白质样品，以提供补充分析方法

•用自动进样器连续或离散提取蛋白质样品进行GPC分析

非机械/剪切

•使用盐、赋形剂、酸/碱、变性剂等实时直接滴定。

•生成德拜图

•探测主持人：嘉宾互动

非常规实验设备示例

机械/剪切应力

•三维打印机和/或基本加工设备（高架搅拌）

•麦克马斯特卡尔是搅拌小零件的好来源，https://mcmaster.com

•注射泵（毛细管剪应力，通过二次检测器提取）

•蠕动泵（再循环、过滤）

•高效液相色谱管和各种配件

非机械/剪切

•非常规应用程序（如滴定和德拜图）更易于使用数据导出功能进行分析，生成用于外部分析的.csv文件

非接触搅拌

•可连接到仪表控制（左）或通过步进电机独立控制（右）

•搅拌器由连接到不锈钢或聚四氟乙烯轴的磁力搅拌棒、压入盖（仪表控制）或直接插入钻孔聚四氟乙烯盖（步进电机控制）的微型轴承组成

•轴/搅拌器不得阻挡光路（距离单元底部约3-4 m

顶置与接触搅拌

•顶部搅拌导致聚集明显减少

•迄今为止检测的蛋白质显示，相对于接触搅拌而言，重现性大大提高•通常观察到滞后相

注：

•耦合磁搅拌，适用于聚集速度小于500 rpm的样品，

步进电机控制需要更高的转速

毛细剪应力

•利用往复式注射泵在银监控下连续提取/注入样本到试管中

•使用相同长度的管子（1米就足够了）

•直接比较所需样品的起始体积相等

•使用一致的流速

•管道材料和直径会对观察到的聚集率产生重大影响，如AR图所示

管材的作用是

聚四氟乙烯>不锈钢>聚醚醚酮

当应力消除时，搅拌和剪切应力聚集停止

•当压力源消除时，聚集停止

•再次施加压力后，聚集将沿着类似的路径继续

蠕动再循环

•蠕动泵通常被认为施加最小剪切应力

•通过HPLC管通过试管再循环的样品

•水和缓冲控制显示光散射没有增加

•不同蛋白质的稳定性差异很大

蠕动循环w/过滤

耦合至二次探测器

•用于通过HPLC管提取样本的注射泵

•可直接通过检测器提取（MALS、UV、荧光等）

•可连接到GPC的自动注射器（Rheodyne MXP7900）

•在施加压力前开始抽取样本

•将从ARGEN到二级探测器的死体积降至最低

热应力与搅拌应力耦合GPC分析

•通过注射器泵通过自动注射器从反应杯中提取样品

•定期将等分样品注入GPC柱，并进行紫外线检测

•在热应力样品（左）中观察到显著的单体损失和骨料形成，但在接触搅拌应力样品（右）中没有观察到

基于耦合ARGENGPC-MALS的搅拌应力分析

•马尔斯银

辨别群体性质的能力

•角度依赖性随骨料尺寸增加而增加

•能够区分大量小骨料（热应力）和少量大骨料

（搅拌应力）

耦合ARGEN-GPC-MALS热应力分析

•与搅拌应力相比，热应力产生非常大的

角度相关性的微小变化

•MALS数据与GPC数据一致，表明热应力期间形成小骨料