NISTmAb 是一种广泛表征的单克隆抗体，旨在用作开发治疗蛋白表征新技术中的标样。在本应用文献中，我们使用 SUPR-DSF 来获取 NISTmAb 的差示扫描荧光法（DSF）的数据，并将结果与差示扫描量热法 (DSC)进行比较。SUPR-DSF 解析了 NISTmAb 所有的三个结构域： CH2(69oC), CH3(83oC)和高解链温度的 FAB 结构域(94oC)[1]。此外， 所测得的 Tm 值与文献的报道完全一致。这些结果证明了，应用 SUPR-DSF 可以轻松获得高质量的蛋白质稳定性信息。
结果SUPR-DSF 测 Tm 值的实验中所获得的荧光光谱可以用来计算重心平均值(barycentric mean,BCM) ，该值可以用来量化 NISTmab 从折叠状态过渡到展开状态时的波长偏移。 图 1(a)所示的 NISTmAb 的 BCM 解链温度曲线显示了三个明显不同的转变点： CH2(69oC), CH3(83oC)和 FAB 结构域(94oC)。 SUPR-DSF 能够准确测量 Fab 的高解链温度，这得益于它能够将样品升温至 105 oC， 而其它 DSF 仪器则很难做到， 这一点在图 1(a)中非常的明显。该图显示了，其它仪器 DSF 无法准确分析 Fab 结构域的解链温度[2]。SUPR-DSF 经过一阶导数的数据处理，并通过归一化，与 DSC 所测得 Fab 域的数据进行比较[1]。 图 2(b)的结果清楚的显示了两种测量方法之间结果的一致性，所有的三个峰值都基本一致。 两种测量方法之间有极佳的相关性这表明， 基于蛋白质的内源荧光（DSF）和 DSC 这两种方法测量蛋白质热稳定性是可以正交验证的。 通过 SUPR -DSF，可在 2 小时内获得 384 个样品的高质量解链温度曲线。这也给高通量测量解链温度曲线，开辟了新的可能性。两种方法所测量得到和计算解链温度都显示在表 1 中。
结论
Protein Stable 公司的 SUPR-DSF 可以通过检测蛋白质内源荧光的峰位移，并快速准确地测量解链温度。 结果表明 SUPR-DSF 能够获得准确的解链温度， 包括像 Fab 结构域这样的超高解链温度(94 oC)。这也验证了基于内源荧光法的 SUPR-DSF 可以获得与 DSC 一致的结果。利用 384 孔板进行测试的优势在于提高了通量，增加了便利性同时降低了样品的消耗。
方法
浓度为 1mg/ml 的 NISTmAb 在 pH6 的 L-组氨酸缓冲液中进行配制， 分别加到 384 孔 PCR 微孔板中，每个孔用量是10μL。分装后，将微孔板离心 60 秒后，用透明胶膜密封。将 SUPR-DSF 中的连续升温程序设置成以每分钟 1oC 的升温速率测量 15oC 到 105oC 的荧光光谱。荧光光谱所获得的数据， 通过 BCM 方法进行计算处理，并量化光谱偏移。 BCM 的数据会处理成温度的函数，并转换成一阶导数再进行分析。根据导数的峰值计算解链温度。所有样品的方法和结果均可获取。